Citricultura - Mejora del material vegeta.

Tema 15: Mejora del material vegetal.

➢ Técnicas de diagnóstico. Serológicas y biológicas.

o Históricamente se ha hecho con test biológicos.

o Principales inconvenientes de los test biológicos → Muy lentos y largos.
→ No servía para realizar test masivos.

o Con la aparición de las técnicas serológicas:
• Test → Más rápidos.
→ Masivos.
→ Más baratos.
Se basan en la relación antígeno-anticuerpo.

o La más conocida y utilizada → Técnica Elisa (Enzyne Linked Inmune Sorben Assay).
Mucho éxito en la detección de la TRISTEZA. En la mayoría de las virosis no se puede utilizar, porque es necesario aislar el virus y conseguir sus anticuerpos.

o TRISTEZA → Los anticuerpos se obtienen del conejo, se aísla el virus, se le inyecta al conejo, y este desarrolla sus anticuerpos, que posteriormente se aislaran. Se venden comercialmente.



➢ Técnicas de saneamiento. Microinjerto.

o No hay una técnica de saneamiento eficaz, hasta la llegada en el 84 de la técnica de microinjerto de ápices caulinares.

o Método:
• Cortar ápice de un brote, se quitan las hojas.
• Ápice de 1 décima de mm (0´1mm), hay que hacerlo con microscopio.
• En el desarrollo de las yemas hay una zona donde aún no se han diferenciado los tejidos, y por tanto no hay xilema ni floema diferenciado (No hay garantía).
• El ápice se lleva a un patrón, y en unas condiciones controladas se desarrolla. Siempre se hace sobre un patrón que tenga una hoja trifoliada, por seguridad (para poder diferenciar las yemas del patrón y de la variedad).
• Después hay que probarlo con test biológicos.
• Ventaja → No presenta características juveniles, y al año ya florecen y producen cosecha.



➢ Conservación y difusión del material vegetal.

o Programa de mejora actual en España, se inicia en el 74.

o En campo, buscar árboles que estuvieran limpios de virosis.

o Para hacer saneamientos tenían que pasar por semillas NUCELARES, con el inconveniente de que tenían características juveniles.

o xej.→ No se encontró ningún mandarino limpio.

o PROGRAMA DE MEJORA SANITARIA DE VARIEDADES DE AGRIOS EN ESPAÑA.

1º Selección de la variedad.
• Buscar el árbol limpio y además debe de presentar y reunir las características deseadas.
• Importación de variedades extranjeras (pasando la estación de cuarentena). Selección de variedades españolas.

2º Cultivo in vitro. Microinjerto.23

3º Planta sana original.
• Banco de germoplasma IVIA*.
• Colección de variedades IVIA, en campo, para seguir con los estudios agronómicos.
• Exportación germoplasma.

4º Bloque de árboles base viveros. AVASA (Asociación de viveristas en Alcoceber).

5º Multiplicación de viveros bloque**.

* Diagnóstico de virosis.
** Diagnóstico de tristeza.



TEST ELISA.

ae) Adición de anticuerpos específicos para tapizar los pocillos.

m) Añadir la muestra: Los agentes patógenos, si los hay, se fijarán sobre los anticuerpos específicos. La muestra son brotes del año (joven), se quitan las hojas y se trituran.

ae.z) Adición de anticuerpos específicos marcados con la enzima. Se fijarán a los agentes patógenos de la muestra.

s) Añadir el substrato idóneo para que pueda actuar la enzima. Para poder detectarlo, de marcador.

La reacción es positiva cuando se produce coloración, (cambio de color), y ésta será proporcional al contenido de agentes patógenos de la muestra.

En general se toman muestra de 5 árboles:

➢ Positivo → Se analiza árbol a árbol.
➢ Negativo → Ninguno tiene virosis.

En campo:

➢ INMUNOIMPRESIÓN ELISA:
o El método es el mismo, pero va preparado sobre un papel (membrana de nitrocelulosa), que lleva los anticuerpos. Se va al campo, y recién cortada la hoja se rasca con el pecíolo, de forma que la savia entre en contacto, y después se lleva a una cubeta, con un reactivo, de tal forma que aparezca una coloración que nos permita diferenciarlo.